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探究不同pH值对次氯酸钠灭菌影响程度

发布时间:2016年2月22日 来源:次氯酸钠 点击:1039

次氯酸钠是最常用的含氯消毒剂品种之一,目前在各领域消毒中应用十分广泛,具有价格低廉、性质活泼、杀菌能力强等优点。为科学推广应用次氯酸钠消毒液,我国于2007年颁布的《次氯酸钠类消毒液卫生质量技术规范》对次氯酸钠消毒液的应用作出了规定。众所周知,所有含氯消毒剂性能和杀菌效果受酸碱度(pH值)影响明显,基本规律是酸性条件有利杀菌作用的发挥,而碱性条件则有利于其稳定性。次氯酸钠也不例外会受pH值影响,对其影响程度和使用中如何掌握调整pH值的研究报道较少,规范中也没有明确指导。为此,本研究对次氯酸钠受pH值影响的范围及其对不同种类微生物杀灭的影响程度进行了实验室观察。现将研究结果报告如下。
 

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用次氯酸钠为AR试剂,使用时按照浓度要求用标准硬水配制;试验所用的次氯酸钠消毒液均为市售医疗器械消毒或血液透析机专用次氯酸钠消毒液。

试验指标菌为大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、铜绿假单胞菌(ATCC15442)、白色念珠菌(ATCC10231)、枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372)。试验用培养基和各种试剂均为市售产品。

1.2 试验方法

1.2.1 有效氯含量测定 

次氯酸钠消毒液有效氯含量测定按照2002年版《消毒技术规范》规定的碘量法进行。

1.2.2 菌悬液的制备 

取各试验菌分离培养的典型菌落接种营养琼脂培养基斜面,于37℃培养24h,使用新鲜斜面培养物。用稀释液洗下斜面上菌苔,并稀释配制成含菌量为5.0×106~5.0×107cfu/ml菌悬液,备用。

1.2.3 中和剂鉴定试验 

以大肠杆菌为试验菌株,试验设6组,按照2002版《消毒技术规范》中规定的中和剂鉴定试验程序进行试验。结果,以第1组无菌生长或菌数远少于第2组;第2组菌数超过第1组且少于第3、4、5组;第3、4、5组菌数符合规定含菌量,且组间误差小于10%;第6组不长菌,表明所选中和剂及其浓度适宜。试验重复3次。

1.2.4 悬液定量杀菌实验 

实验分为清洁条件和含有机物条件(将菌悬液与0.3%小牛血清白蛋白溶液对倍稀释)等2组。实验在20℃水浴中进行,并将所有消毒液和菌悬液均恒温5min。在无菌试管内加入4.5ml试验浓度消毒液(阳性对照为稀释液)与0.5ml菌悬液,混匀。立即计时并作用至规定时间,取0.5ml样液加于4.5ml中和剂试管内,混匀。中和作用10min,取1ml样液倾注接种培养,进行活菌计数,计算杀灭率。试验重复3次。

2 结果

2.1 中和剂鉴定试验结果

试验结果表明,用含10g/L硫代硫酸钠、20g/L吐温80、3g/L卵磷脂的磷酸盐缓冲液(PBS)作为中和剂,可有效中和试验浓度次氯酸钠对试验菌的残余作用,中和剂和中和产物对试验菌及培养基均无影响。

2.2 悬液定量杀菌试验结果

2.2.1 试剂次氯酸钠杀菌效果 

次氯酸钠消毒液pH值在5~12范围内,用有效氯100mg/L作用10min,对悬液内大肠杆菌杀灭率达到100.00%,pH值≥11对金黄色葡萄球菌杀灭率下降;用有效氯200mg/L作用10min,对悬液内铜绿假单胞菌和白色念珠菌杀灭率均为100.00%。次氯酸钠消毒液pH值在5~9范围内,用有效氯500mg/L作用60min,对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率均为100.00%,当pH值≥11时,其杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢效果下降至95.55%。经分析显示,次氯酸(HOCl)杀菌活性高于ClO-,当消毒液pH值从5上升至12时,次氯酸钠消毒液中HOCl含量逐渐下降,而ClO-含量逐渐增加。本试验结果显示次氯酸钠杀菌效果随pH值升高而下降。本次实验还发现,当次氯酸钠消毒液pH值在11~13范围内时,其对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果反而增强。

2.2.2 次氯酸钠产品杀菌效果 

对市售6种次氯酸钠产品进行杀菌试验,指标菌选择枯草杆菌黑色变种芽孢。实验结果表明,市售6种次氯酸钠消毒液均使用有效氯浓度为500mg/L时,pH值均在11左右,对枯草杆菌黑色变种芽孢作用60min,其平均杀灭率波动在75.57%~99.75%。

3 讨论

次氯酸钠消毒液的杀菌原理主要是次氯酸钠水溶液生成HOCl,HOCl是中性分子,分子空间结构与水相近,易扩散到带电荷的菌体表面,并通过细胞壁穿透到菌体内部,作用于微生物核酸,同时HOCl可以将-SH氧化为二硫键,导致细菌死亡。此外,次氯酸分解产生的新生氧活性很高也能氧化菌体蛋白质,改变细胞膜的通透性,使细胞内容物向外渗漏,导致细菌死亡。

近年来,次氯酸钠消毒液对于牙科器材的消毒成为国外研究热点,美国牙科协会(ADA)、疾病预防控制中心(CDC),澳大利亚牙科协会颁布了口腔印模消毒指导原则,次氯酸钠为推荐消毒液。同时,EPA推荐将次氯酸钠用作表面消毒。中国颁布《次氯酸钠类消毒液卫生质量技术规范》对其微生物杀灭效果的作用条件作出了规定。

次氯酸钠消毒液随pH值的升高而稳定性增强,但其杀菌效果随pH值的升高而减弱。为了增强次氯酸钠消毒液产品稳定性,生产厂家将其产品pH值升高,而pH值升高后的产品其杀菌效果下降。为了能够更安全的使用次氯酸钠消毒液,在使用条件下将建议次氯酸钠消毒液pH值范围设定为7~9为宜。

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