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17% EDTA联合1%次氯酸钠对根管内粪肠球菌的清除效果探究

发布时间:2022年3月2日

粪肠球菌是根管治疗失败患牙内最常见的细菌之一,被认为是导致根管治疗失败的一个重要因素。次氯酸钠是一种传统根管冲洗剂,具有很强的组织溶解和抑制细菌的能力,但随着浓度增加,其组织毒性也增加,1%为可接受的生物相容性浓度。EDTA为氨羧络合剂,具有很强的脱矿能力。有研究表明EDTA和次氯酸钠联合应用,能达到相互补偿相互增效的作用,其抑菌效果优于单独使用次氯酸钠。本实验研究在离体牙上建立粪肠球菌根管感染模型,采用17%EDTA联合1%次氯酸钠作为根管冲洗剂,检测它们对根管内粪肠球菌的杀菌效果,并与5.25%、25%、1%次氯酸钠及0.9%Nacl4种根管冲洗剂进行对比,旨在为临床寻找一种理想的根管冲洗剂提供实验依据。

1材料和方法

1.1材料及设备

标准粪肠球菌菌株(ATCC29212)(江西省微生物研究所);脑心浸液粉(brain_heartjnfUSjCyⅢI)(法国生物梅里埃公司);CO2恒温培养箱(美国Foma);全自动微生物分析系统(法国生物梅里埃公司);1%、25%、5、25%次氯酸钠、5%硫代硫酸钠和17%EDTA(南昌大学第一附属医院配制)。

1、2制作实验标本

选择新鲜拔除的上下颌前牙47颗,单根管,根尖孔发育完全,无近髓龋损,未做过根管治疗,无根裂等缺陷。截冠,保留根长12mm去牙髓,扩通根管,K锉预备根管至40#复合树脂封闭根尖孔。121℃、1.5MPa,15min高温高压灭菌后,选取2个标本检测灭菌效果。

1.3菌株活化

将80℃保持的粪肠球菌菌株接种于无菌的BH液体培养基中,37℃下,CO2孵育箱中孵育24h吸取50μ菌液再接种于另一无菌的BHI液体培养基中,37℃下,CO2孵育箱中孵育16~18h收集菌液。

1.4建立根管感染模型

调配菌液浓度为6×l08CFU/ml接种于无菌根管内培养。37℃下,CO2孵育箱中孵育。隔日更换新鲜菌液,感染21d建立根管感染模型。每次更新培养基至21d时,根据菌落形态、革兰染色、触酶试验,全自动微生物分析仪生化鉴定,确定无杂菌污染后纳入进一步实验。随机选取5个标本制备组织学切片,Brown&Brenn细菌染色,观察牙本质中细菌感染情况。

1.5实验分组及根管冲洗

将剩余的40个标本按随机数字表法分为A、B、C、D、E5组,每组8个标本。器械预备同时,A、B、C、D、E组分别采用5.25%、25%、1%次氯酸钠、17%EDTA+1%次氯酸钠、0.9%NaCl冲洗根管。冲洗液均为新鲜配制。各组严格按以下方法操作:2m冲洗液冲洗并充盈根管,40#K锉通畅根管,然后依次使用45#-60#不锈钢K锉逐号扩大根管,每更换一号锉,用2m冲洗液冲洗(D组依次17%EDTA1ml、l%次氯酸钠1ml),每次作用时间1min(D组17%EDTA30s、1%次氯酸钠30s),共6次12ml,总作用时间6min,冲洗时,注射器针头尽可能插入根尖1/3以无阻力,不嵌塞,回流通畅为准,并不时上下、左右移动针头,缓慢匀速冲洗。根管预备冲洗后,A、B、C、D组用5%的硫代硫酸钠2ml和残余的次氯酸钠。最后均用2ml生理盐水冲洗。

1、6根管内取样及细菌计数

各组根管冲洗前、后分别取样。用无菌纸尖吸干根管内的培养液(冲洗前)或冲洗液(冲洗后),注入0.2ml生理盐水,静置1min30#菌纸尖插入根管中停留1min取样液,放入装有1ml生理盐水的EP-Pendor中,混匀,10倍系列稀释,取稀释样本接种于BH血琼脂平皿上,培养48h后计数菌落数(CFU/ml)

1.7细菌复苏

第2次取样后分别在根管内插入30饱含BHI液体培养基的纸尖,孵育72h后夹出纸尖放入无菌BHI液体培养基中。48h后肉眼见培养基浑浊即为细菌复苏,并以前法确定是否有杂菌污染。

1.8统计学处理

数据行lg(CFU/ml+1)转换,用SPSS13.0统计软件进行方差分析。

2结果

用于实验的47个标本中,灭菌后的2个样本培养后未发现细菌生长;根管感染21d后5个样本病理结果均显示粪肠球菌感染了牙本质小管,剩余的40个实验样本根管冲洗前均培养出粪肠球菌,粪肠球菌根管感染模型建立的成功率为100%。单因素方差分析显示,冲洗前各组根管内细菌量差异无显著性(F=0.954P=0.436);冲洗后即刻,各组根管内细菌量的减少差异有显著性(F=32.252P=0.000)。5组根管冲洗前、后根管内的细菌量及细菌计数差值见表1。

细菌复苏实验显示各组根管内均无杂菌污染,经72h复苏后,所有样本都显示有粪肠球菌再生长。
表1
 

3讨论

牙髓病及根尖周病是口腔临床的常见疾病,主要由细菌感染所致。粪肠球菌在根管治疗失败患牙内的检出率可达47%,是感染根管中最难杀灭的菌属,对很多药物存在耐受性,还具有很强的渗透能力,极易侵入牙本质小管,是目前评价各种感染清除措施时最常用的目标菌种。本实验建立了稳定的粪肠球菌根管感染模型,具有较好的实用性。

次氯酸钠是目前临床上最常用的根管冲洗液,可以有效溶解玷污层中的有机成分,并将根管中松散的残屑冲洗出来,还可杀灭根管中细菌,其组织溶解和杀菌能力与其浓度密切相关。次氯酸钠液的浓度越高,组织溶解能力及抗菌性越强。但高浓度的次氯酸钠能刺激或影响生活组织,极易损伤口腔黏膜和根尖周组织,而且异味明显,临床上使用时必须使用橡皮障,并配合“四手操作”。本实验A、B、C3组根管预备时分别采用5.25%、2.5%、1%次氯酸钠冲洗,结果显示,根管冲洗前后,A、B、C3组根管内的粪肠球菌量均显著减少(P<0.01),减少量均明显大于E组(P<0.05),且A、B、C3组根管内粪肠球菌减少量之间差异有显著性(P<0.05),说明次氯酸钠能有效清除根管内粪肠球菌,且抑菌能力随着浓度的升高而增强,与Berbe%研究结果相一致。

目前尚无一种冲洗剂在单独使用时能完全清除根管内玷污层,需采用2种或3种冲洗剂联合冲洗。次氯酸钠和EDTA联合使用可有效去除根管内玷污层。EDTA与羟基磷灰石中的钙离子发生螯合反应,去除玷污层中的无机成分,使得玷污层中有机纤维遗留在根管壁,这些有机纤维在根管壁的积累阻止了EDTA进一步的脱矿作用;而次氯酸钠具有溶解有机纤维的能力,为EDTA的脱钙作用起到清道夫的作用。次氯酸钠与EDTA联合冲洗,可互补的去除玷污层中有机和无机成分,促使牙本质小管开放,更深入地抑制牙本质小管和侧副根管中的细菌,达到相互补偿相互增效的效果。次氯酸钠和EDTA两者联合应用时,抑菌效果优于单独使用次氯酸钠。本实验D组采用17%EDTA+1%次氯酸钠联合冲洗根管,结果显示,D组根管内的粪肠球菌量显著减少(P<0.01)。经统计学分析,根管冲洗后,D组根管内粪肠球菌减少数量明显小于A组(5.25%次氯酸钠组)(P<0.01),显著大于C组(1%次氯酸钠组)(P<0.05),与B组(25%次氯酸钠组)间差异无显著性(P>0.05)。说明根管预备时采用17%EDTA+1%次氯酸钠联合冲洗,可有效清除根管内粪肠球菌;也提示其杀菌效果优于单独使用的1%次氯酸钠,与25%次氯酸钠杀菌效果相近似。

本实验机械化学预备冲洗后所有样本在根管内加入BHI培养液培养72h均出现阳性结果,可能是因为冲洗液难以到达根管系统的不规则区域内,也可能与粪肠球菌的高耐药性有关。

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